Zebrafish TUNEL assayZebrafish embr

Zebrafish TUNEL assayZebrafish embryos were collected at 54–60 hpf and fixed with 4% PFA. After methanol dehydration, rehydration, proteinase K digestion and acetone treatment, the embryos were permeabilized in incubating buffer (0.1% Triton X-100, 0.1% sodium citrate in PBS) for 30 min at RT. Then TUNEL staining was performed using the In Situ Cell Death Detection Kit TMR red (Roche) as the manufacturer’s instruction. After that, the embryos were incubated with mouse anti-GFP antibody (Abmart, M20004, 1:500) followed by incubation of Alexa-Fluor 488-conjugated secondary antibody.

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斑马鱼TUNEL测定<br>斑马鱼胚胎在54-60 HPF收集并用4％PFA。甲醇脱水，补液，蛋白酶K消化和丙酮处理后，将胚在（在PBS中的0.1％Triton X-100，0.1％柠檬酸钠），在室温孵育30分钟缓冲液中透化。然后，使用原位细胞凋亡检测试剂盒TMR红色（Roche公司）作为制造商的说明书进行TUNEL染色。然后用Alexa-Fluor488的缀合的二级抗体一起温育：在此之后，将胚与小鼠抗GFP抗体（500 Abmart，M20004，1）温育。

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斑马鱼TUNEL测定<br>斑马鱼胚胎在54-60 hpf下采集，固定为4%PFA。甲醇脱水、补液、蛋白酶K消化和丙酮处理后，在培养缓冲液中渗透胚胎（0.1%Triton X-100，0.1%柠酸钠在PBS中）在RT30分钟。然后，使用原位细胞死亡检测试剂盒 TMR 红色（Roche）作为制造商的说明进行 TUNEL 染色。之后，用小鼠抗GFP抗体（Abmart，M20004，1：500）孵育胚胎，然后孵化Alexa-Fluor 488结合的二次抗体。

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斑马鱼TUNEL分析<br>斑马鱼胚胎采集于54-60hpf，用4%PFA固定。在甲醇脱水、再水化、蛋白酶K消化和丙酮处理后，胚胎在孵育缓冲液（0.1%Triton X-100，0.1%枸橼酸钠）中渗透30 min，然后按照制造商的指示使用原位细胞死亡检测试剂盒TMR-red（Roche）进行TUNEL染色。之后，用小鼠抗GFP抗体（Abmart，M20004，1:500）孵育胚胎，然后用Alexa Fluor 488结合二级抗体孵育。

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