Methods for isothermal amplificatio

Methods for isothermal amplification of nucleic acids are gained more attention in the last two decades. For isothermal amplification, DNA polymerases with strand displacement activity are required, and Bst exo- is one of the most commonly used polymerases. However, Bst exo- is able to cause nonspecific DNA amplification through multimerization, which leads to a set of undesirable by-products. In this study, circumstances that facilitate DNA multimerization by Bst exo- polymerase have been determined. We found that an essential requirement for multimerization is the presence of short (50-60 bp) DNA duplexes formed through primer extension after annealing on the template or in homo- and heterodimers. The highest multimerization efficiency is observed for Bst 2.0 polymerase in buffers with a high salt concentration and/or in the presence of reducing agents (for example, β-mercaptoethanol). Multimerization occurs mainly at 55-60 °С, while specific isothermal amplification is more efficien

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用于核酸等温扩增方法在过去二十年里都获得了更多的关注。对于等温扩增，需要具有链置换活性的DNA聚合酶，和BST外切是最常用的聚合酶之一。然而，BST外切能够使得通过多聚化的非特异性DNA扩增，这导致副产物的一组不希望的。在这项研究中，这方便的Bst外切聚合酶DNA多聚化的情况下已经确定。我们发现，对于多聚化的基本要求是在模板上或在同二聚体和异二聚体退火后通过引物延伸而形成短（50-60个碱基）的DNA双链体的存在。最高多聚效率是观察的Bst 2。0聚合酶在具有高盐浓度和/或在还原剂（例如，β巯基乙醇）的存在缓冲区。多聚化主要发生在55-60°С，而特定的等温扩增更efficien

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近二十年来，核酸等温扩增的方法越来越受到人们的重视。对于等温扩增，需要具有链位移活性的DNA聚合体，Bst exo-是最常用的聚合体之一。然而，Bst exo- 能够通过多美化引起非特异性DNA扩增，从而导致一组不良的副产品。在这项研究中，已经确定了促进Bst exo聚合酶DNA多倍化的情况。我们发现，多美化的基本要求是存在在模板上退火后或同源和异构体后通过引物延伸形成的短（50-60 bp）DNA双工。Bst 2.0 聚合酶在高盐浓度的缓冲液中和/或存在还原剂（例如 β-美尔卡托乙醇）时观察到最高的多倍增殖效率。多美化主要发生在55-60°，而特定的等温放大更有效

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近二十年来，核酸的等温扩增方法越来越受到人们的重视。对于等温扩增，需要具有链置换活性的dna聚合酶，bst外显子是最常用的聚合酶之一。然而，bst外显子能够通过多聚反应引起非特异性dna扩增，从而产生一系列不良的副产物。在这项研究中，已经确定了有助于BST外显聚合酶DNA多聚的环境。我们发现多聚反应的一个基本要求是存在短（50-60bp）dna双工体，这些dna双工体是在模板或同型和异型二聚体上退火后通过引物延伸形成的。bst 2.0聚合酶在高盐浓度和/或存在还原剂（如β-巯基乙醇）的缓冲液中的多聚效率最高。多聚反应主要发生在55-60°C，而比等温放大更有效。<br>

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