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The recombinant fibre 1 protein was
The recombinant fibre 1 protein was expressed in Escherichia coli. A gene fragment encoding the fulllength fibre 1 protein was cloned into the prokaryotic expression vector, pET48a. The recombinant plasmid was transformed into BL21 (DE3) competent cells (TransGene) for inducible expression. The proteins were purified by Ni Sepharose Excel resin (GE Healthcare), following the manufacturer’s recommended protocol. The fibre 2 protein, the CAR protein, and the ECD, D1, and D2 domains of CAR were transiently expressed by transfecting Expi293F cells (Thermo Fisher Scientific) using Polyfectine . Cell culture supernatants were harvested at 5 days post-transfection and centrifuged at 10,000 ×g for 30 min to remove cell debris. The supernatants were sterile-filtered and purified with a protein A resin. The expression of recombinant proteins was detected by SDS-PAGE and western blot analysis, using appropriate antibodies.
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重组纤维1蛋白在大肠杆菌中表达。将编码全长纤维1蛋白的基因片段克隆到原核表达载体pET48a中。将重组质粒转化到BL21（DE3）感受态细胞（TransGene）中以进行诱导表达。按照制造商推荐的方案，使用Ni Sepharose Excel树脂（GE Healthcare）纯化蛋白质。通过使用Polyfectine转染Expi293F细胞（Thermo Fisher Scientific），瞬时表达CAR的纤维2蛋白，CAR蛋白以及ECD，D1和D2结构域。转染后5天收集细胞培养上清液，并以10,000×g离心30分钟以去除细胞碎片。将上清液无菌过滤并用蛋白A树脂纯化。
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重组纤维1蛋白在大肠杆菌中表达。编码全长纤维1蛋白的基因片段被克隆到原核表达载体pET48a中。重组质粒被转化为BL21（DE3）称能力细胞（TransGene），用于可理解的表达。蛋白质由Ni Sepharose Excel树脂（GE医疗保健）按照制造商推荐的协议进行纯化。CAR的纤维2蛋白、CAR蛋白和ECD、D1和D2域通过使用聚感染素的Expi293F细胞（热费舍尔科学）瞬态表达。细胞培养超级物在转染后5天收获，在10，000×g下离心30分钟，以清除细胞碎片。超滤剂被无菌过滤，用蛋白质 A 树脂进行纯化。利用适当的抗体，通过SDS-PAGE和西方印迹分析检测重组蛋白的表达。
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重组纤维1蛋白在大肠杆菌中表达。将编码全长纤维1蛋白的基因片段克隆到原核表达载体pET48a中，转化BL21（DE3）感受态细胞进行诱导表达。按照制造商推荐的方案，通过Ni-Sepharose-Excel树脂（GE-Healthcare）纯化蛋白质。纤维2蛋白、CAR蛋白以及CAR的ECD、D1和D2结构域通过转染Expi293F细胞（Thermo-Fisher-Scientific）使用聚鸟嘌呤瞬时表达。转染后5d取细胞培养上清，10000×g离心30min，去除细胞碎片。上清液无菌过滤并用蛋白a树脂纯化。用SDS-PAGE和western blot分析法检测重组蛋白的表达。<br>
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