2. Washing of the cells2.1 .Hyperto

2. Washing of the cells2.1 .Hypertonic ShockIf the pellet is contaminated with erythrocytes, then carry out a hypertonic shock" as follows.Resuspend the pellet in 2mL sterile or distilled water and incubate for 50-60 seconds.To restore the normal osmolarity, add 2x PBS to the suspension. After that dilute the suspension with 1 x PBS or culture medium (AIM-V/RPMI) to 20一30mL and centrifuge the suspension again at 465g for 15 minutes.If the BAL is contaminated with many red blood cells a density gradient centrifugation similar to the density gradient centrifugation used in the standard T-SPOT.TBTest can be performed.

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2.细胞的洗涤 2.1 .Hypertonic休克 如果沉淀污染红细胞，再进行如下一个？高渗冲击”。 重悬在2mL无菌粒料或蒸馏水并孵育50-60秒。 为了恢复正常摩尔渗透压浓度，添加2倍的PBS悬浮液中。该稀释后用1×PBS或培养基（AIM-V / RPMI），以20一30毫升，悬浮液在465克15分钟再次离心悬浮液。 如果BAL中掺有许多可以执行类似于标准T-SPOT.TBTest中使用的密度梯度离心的密度梯度离心。

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2. 清洗细胞 2.1 .超音速冲击 如果颗粒被红细胞污染，则进行超音速冲击""，如下所示。 将颗粒重新在2mL无菌或蒸馏水中，孵育50-60秒。 要恢复正常的渗透性，请向悬架添加 2x PBS。之后，用1 x PBS或培养基（AIM-V/RPMI）稀释悬浮液至20~30mL，并在465g下再次离心15分钟。 如果BAL被许多红血球污染，密度梯度离心类似于标准T-SPOT中使用的密度梯度离心。可以执行 TB 测试。

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2清洗电池 2.1.高渗性休克 如果小球被红细胞污染，则进行如下“高渗休克”。 再将小球放入2mL无菌或蒸馏水中，培养50-60秒。 为了恢复正常的渗透压，在悬浮液中加入2倍PBS。然后用1 x PBS或培养基（AIM-V/RPMI）稀释至20-30mL，在465g下再次离心15分钟。 如果BAL被许多红血球污染，密度梯度离心法与标准T-斑点测试可以执行。

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