Liquid chromatography with tandem m

Liquid chromatography with tandem mass spectrometry analysis. The tryptic peptides were dissolved in 0.1% formic acid (solvent A), directly loaded onto a home-made reverse-phase analytical column (15-cm length, 75 μm inner diameter.). The gradient was increased from 6% to 23% solvent B (0.1% formic acid in 98% acetonitrile) over 16min, then 23% to 35% for 8min and was increased to 80% for 3min, then held at 80% for the last 3min, all at a constant flow rate of 400nl min−1 on an EASY-nLC 1000 UPLC system. The peptides were applied to a nanospray ion source followed by tandem mass spectrometry (MS/MS) in a Q Exactive Plus system (Thermo Fisher Scientific) coupled online to the ultra-performance liquid chromatography system. The electrospray voltage applied was 2.0 kV. The m/z scan range was 350 to 1800 for a full scan, and intact peptides were detected in an Orbitrap mass analyzer at a resolution of 70,000. Peptides were then selected for MS/MS using a normalized collision energy setting of 28 and thefragments were detected in the Orbitrap at a resolution of 17,500. A data-dependent procedure that alternated between one MS scan followed by 20 MS/MS scans with 15.0 s dynamic exclusion was carried out. The automatic gaincontrol was set at 5E4.

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液相色谱串联质谱分析。将胰蛋白酶解 肽溶解在0.1％的甲酸（溶剂A）中，直接上样到 自制的反相分析柱（长度为15 cm，内径 为75μm ）上。在16 分钟内将梯度从6％的溶剂B增加到23％（0.1％的甲酸在98％乙腈中的溶液），然后在23％的条件下从23％增加到35％， 在3min的时间内增加到80％，最后保持在80％ 3分钟，在EASY-nLC 1000 UPLC系统上，恒定流速 为400nl min-1 。将肽段应用于 纳米喷雾离子源，然后 在Q Exactive Plus系统（Thermo Fisher Scientific）中在线串联到质谱仪上进行串联质谱（MS / MS）。 超高效液相色谱系统。施加的电喷雾电压 为2.0kV。完整扫描的m / z扫描范围是350至1800，并 在Orbitrap质量分析仪中以70,000的分辨率检测到完整的肽段。 然后使用归一化碰撞能量设置为28选择用于MS / MS的肽 段，并在Orbitrap中以17500的分辨率检测到这些片段。 进行了一个与数据相关的过程，该过程在一次MS扫描与随后的20次 MS / MS扫描之间以15.0 s动态排除时间交替进行。自动增益 控制设置为5E4。

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具有串联质谱分析的液相色谱。尝试 肽溶解在0.1%的甲酸（溶剂甲），直接加载到 一个自用的逆相分析柱（15厘米长，75μm内 直径）。梯度从6%增加到23%溶剂B（0.1%formic 酸在 98% 乙酰），超过 16 分钟，然后 23% 到 35% 为 8 分钟，并增加 到 80% 3 分钟，然后保持 80% 的最后 3 分钟，所有在恒定的流速 的 400nl min=1 在 Easy-nlc 1000 UPLC 系统上。多肽被应用 到纳米喷离子源，然后是串联质谱仪（MS/MS） 在Q精确加系统（热费舍尔科学），在线耦合到 超高性能液相色谱系统。施加的电喷电压 是 2.0 kv 。m/z 扫描范围为 350 到 1800，用于完整扫描，并且是完整的肽 在轨道rap质量分析仪中检测到，分辨率为70，000。肽是 然后使用 28 和 在轨道片中检测到碎片，分辨率为17，500。 一个与数据相关的过程，在一次 MS 扫描后继 20 个 MS 扫描之间交替 执行具有 15.0 动态排除的 MS/MS 扫描。自动增益 控件设置为 5E4。

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液相色谱-串联质谱分析。胰蛋白酶 将肽溶解在0.1%甲酸（溶剂A）中，直接装载到 自制反相分析柱（长15cm，内75μm） 直径）。梯度从6%增加到23%溶剂B（0.1%甲酸 酸在98%乙腈中浸泡16min，然后在23%到35%之间8min，并且增加 在80%的条件下保持3分钟，然后在80%的温度下保持3分钟，所有这些都是在恒定的流速下进行的 最小值为400nl−1 在一个简单的nLC 1000 UPLC系统上。应用肽 在串联质谱法（MS/MS）之后对纳米喷雾离子源进行分析 在Q Exactive Plus系统（Thermo Fisher Scientific）中 超高效液相色谱系统。施加的电喷雾电压 是2.0千伏。完整扫描的m/z扫描范围为350到1800，完整的肽 在轨道探测器质量分析仪上检测到的，分辨率为70000。肽是 然后使用标准化碰撞能量设置28和 以17500的分辨率在轨道上探测到碎片。 一种与数据有关的程序，在一次MS扫描后20次扫描之间交替进行 用15.0s动态排除法进行MS/MS扫描。自动增益 对照组设为5E4。

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