Resuspend the pellet in 0,7m1 AIM V

Resuspend the pellet in 0,7m1 AIM V culture medium and process the T-SPOT.TBAssay according the procedure for the PBMCs.Remark: Cell counting should be carried out using a hemocytometer rather than an automatedhemoanalyzer since there are likely to be a high concentration of macrophages which may giveerroneous results when a hematology ana加zer is used. Even when using a hemocytometer it may be difficult to count the cells due to the high concentration of macrophages therefore only the smaller, viable cells should be counted,. Similarly the suspension should be pipetted from the centre of the well rather than close to the wall of the well to reduce the number of macrophages obtained..When a black" cell suspension is incubated over night the samples should be wash 6一8 times to eliminate the black" macrophages.

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将沉淀重悬于0.7ml AIM V培养基中，并按照PBMC的程序进行T-SPOT.TBAssay。 备注：细胞计数应使用血细胞计数器而不是自动血液分析仪进行，因为使用血液分析仪时 ，可能存在高浓度的巨噬细胞，可能会产生 错误的结果。即使使用血细胞计数器，由于巨噬细胞的浓度高，可能也难以对细胞进行计数，因此仅应对较小的，有活力的细胞进行计数。同样，应从孔的中心而不是靠近孔的壁上吸取悬浮液，以减少获得的巨噬细胞的数量。 当将“黑色”细胞悬液孵育过夜时，应将样品洗涤6至8次，以消除“黑色”巨噬细胞。

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将颗粒重新用 0，7m1 AIM V 培养介质重新暂停，并处理 T-SPOT。根据 PBMC 的程序进行 TAssay。 备注：细胞计数应使用血细胞计进行，而不是自动 血分析器，因为有可能有一个高浓度的巨噬细胞，这可能给 使用血液学分析器时的错误结果。即使使用血细胞计，由于巨噬细胞的高浓度，可能很难计算细胞数量，因此只计算较小、可行的细胞。同样，悬架应从井中心移水，而不是靠近井壁，以减少获得的巨噬细胞数量。 当黑"细胞悬浮液在夜间孵育时，样品应洗6~8次，以消除黑"巨噬细胞。

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在0.7m1 AIM V培养基中重新悬浮颗粒并处理T-斑点试验根据PBMCs的程序。 注：细胞计数应使用血细胞仪而不是自动进行 血液分析仪，因为可能有高浓度的巨噬细胞 使用血液学分析仪时的错误结果。即使使用血细胞仪，由于巨噬细胞浓度高，也很难对细胞进行计数，因此只应计算较小的、有活力的细胞，。同样地，悬浮液应从微孔中心吸出，而不是靠近孔壁，以减少获得的巨噬细胞数量。。 当一个“黑色”细胞悬浮液在夜间培养时，样品应清洗6-8次，以消除“黑色”巨噬细胞。

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