Aniline blue stainingPrepare 20 ml

Aniline blue staining
Prepare 20 ml of 8 N NaOH from sodium hydroxide pellets in double distilled water (A. bidest.) in a 25 ml beaker.
Prepare 50 ml of Sørensen’s phosphate buffer (0.1 M, pH = 8.0).
Transfer algae to 2 ml Eppendorf tubes (Figure 1B) and wash them once with culture medium.
Note: Washing can be omitted if algae from lab cultures are investigated. Avoid mechanical stress or damage to the cells by using a pair of fine-pointed tweezers. This prevents additional short-term incorporation of callose in the cell walls. Single-celled organisms or cells surrounded by a sticky mucilage layer can be transferred easily by using glass pipettes.
Decant and discard culture medium and add 1.5 ml 8 N NaOH in the tube (Figure 1C).
Note: Centrifuge at ~1,000 x g to sediment biomass in order to remove liquid.
Incubate the tubes at 60 °C for 20 min.

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Aniline blue staining Prepare 20 ml of 8 N NaOH from sodium hydroxide pellets in double distilled water (A. bidest.) in a 25 ml beaker. Prepare 50 ml of Sørensen’s phosphate buffer (0.1 M, pH = 8.0). Transfer algae to 2 ml Eppendorf tubes (Figure 1B) and wash them once with culture medium. Note: Washing can be omitted if algae from lab cultures are investigated. Avoid mechanical stress or damage to the cells by using a pair of fine-pointed tweezers. This prevents additional short-term incorporation of callose in the cell walls. Single-celled organisms or cells surrounded by a sticky mucilage layer can be transferred easily by using glass pipettes. Decant and discard culture medium and add 1.5 ml 8 N NaOH in the tube (Figure 1C). 注：离心〜1000 XG，以去除液体生物质沉淀。 孵育所述管在60℃下20分钟。

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Aniline 蓝色染色 在25ml烧杯中用氢氧化钠颗粒制备20毫升8N NaOH。 制备 50 ml Sürensen 的磷酸盐缓冲液（0.1 M，pH = 8.0）。 将藻类转移到2ml Eppendorf管（图1B），用培养基清洗一次。 注意：如果调查了实验室培养物的藻类，则可以省略清洗。使用一对细尖钳子，避免机械应力或对细胞的损坏。这可以防止在细胞壁中额外短期加入钙化物。使用玻璃移液器，可以很容易地转移被粘性粘液层包围的单细胞生物或细胞。 去火和丢弃培养基，并在管中加入1.5ml 8 N NaOH（图1C）。 注：在±1，000 x g的沉淀物量下离心，以去除液体。 在60°C下孵育管子20分钟。

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苯胺蓝染色法 在25毫升烧杯中从氢氧化钠球团中制备20毫升8 N NaOH，用双蒸馏水（A.Best.）。 制备50毫升S_rensen磷酸盐缓冲液（0.1 m，pH=8.0）。 将藻类转移到2毫升Eppendorf试管中（图1b），用培养基清洗一次。 注：如果对实验室培养物中的藻类进行调查，则可以省略清洗。使用细尖镊子避免机械应力或损坏细胞。这可以防止胼胝质在细胞壁中的短期结合。单细胞生物或被粘稠粘液层包围的细胞可以通过使用玻璃移液管容易地转移。 倾析并丢弃培养基，并在试管中添加1.5 ml 8 N NaOH（图1C）。 注：以约1000 x g的速度离心至沉积物生物量，以去除液体。 将试管在60℃下培养20分钟。

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