1. Preparation of crude extract fro

1. Preparation of crude extract from freeze-dried berry powder.To begin the this procedure, prepare the reagents as outline in the expert protocol.Next，Weigh out 10 g of freeze-dried blackberry powder. add the blackberry powder to a 1 L round-bottom flask containing 100 mL of 80% aqueous ethanol.Place the flask into an ultrasonic bath at 25 °C. Under continuous nitrogen purging in subdued light. Sonicate the mixture for 20 min at 42 kHz, 135 W.After this, use a chilled buchner funnel with vacuum suction to filter the mixture through a #2 filter paper.NOTE: At the end of this step, residuals of the sample appear on the filter paper; this is called filter cake.Rinse the filter cake with 50 mL of 100% ethanol. Save the filtrate and add the filter cake to a 1 L round-bottom flask containing 100 mL of 80% aqueous ethanol.Repeat the extraction process by sonicating, filtering and washing the mixture. Combine the two filtrates into a round-bottom flask containing 50 mL of 80% aqueous ethanol.NOTE: The final volume should be approximately 300 mL.Use a rotary evaporator at 62 °C and 50 rpm to evaporate the solvent. Continue this until the ethanol no longer evaporates. NOTE: This process takes approximately 45 min.Transfer the sample to a 50 mL conical tube. Inject nitrogen gas at the top of the tube for 10 min to evaporate any remaining ethanol .NOTE: This step is needed to ensure the complete evaporation of the ethanol. The volume of the sample at this step is approximately 20 mL.Freeze the sample at -80 °C for at least 24 h.NOTE: This step is needed to allow for a more efficient freeze-drying process.Freeze-dry the sample at -50 °C for approximately 8 h. Store the samples at -20 °C until ready to use. NOTE: The freeze dryer creates a powerful vacuum at -50 °C inside the chamber to dry the samples but preserves most of the compounds, such as polyphenols.Preparation of purified polyphenol extractsWeigh the freeze-dried extracted samples. NOTE: The volume of the extract at this step is approximately 10 mL. Add approximately ~20 mL of chloroform to a 100mL beaker with the sample. use a stir-plate. mix the solution for 5 min. Pour the mixture into a separating funnel. Let the crude extract decant for 1 h at RT. NOTE: At this step, a two-phase mixture will form. After this, discard the bottom layer (chloroform phase) and collect the aqueous layer into a clean beaker. Add two volumes of ethyl acetate to the beaker. Use a magnetic stir bar to stir the mixture for 5 min at RT. Use a chilled Buchner funnel with vacuum suction to filter the mixture through #2 filter paper Transfer the filtered sample to a round-bottom flask. Use the rotary evaporator to 62 °C and 50 rpm and evaporate the ethyl acetate for about 30 min. Freeze-dry the sample at -50 °C for 8 h. Transfer the sample to a 50 mL conical tube and store it at -20 °C.(negative twenty degree celsius)

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1.从冷冻干燥的浆果粉中制备粗提物。 要开始此过程，请按照专家规程中的概述准备试剂。 接下来，称出10克冷冻干燥的黑莓粉。 将黑莓粉加到装有100 mL 80％乙醇水溶液的1 L圆底烧瓶中。 将烧瓶放入25°C的超声波浴中。 在弱光下连续吹扫氮气。在42 kHz，135 W的条件下 将混合物超声处理20分钟。之后，使用带有真空抽吸功能的冷布氏漏斗通过2号滤纸过滤混合物。 注意：在此步骤结束时，样品的残留物会出现在滤纸上。这叫做滤饼。 用50 mL的100％乙醇冲洗滤饼。保存滤液并将滤饼加到装有100 mL 80％乙醇水溶液的1 L圆底烧瓶中。 通过超声，过滤和洗涤混合物来重复提取过程。 将两种滤液合并到装有50 mL 80％乙醇水溶液的圆底烧瓶中。 注意：最终体积应约为300 mL。 使用62°C和50 rpm的旋转蒸发仪蒸发溶剂。继续进行此操作，直到乙醇不再蒸发。 注意：此过程大约需要45分钟。 将样品转移到50 mL锥形管中。在试管顶部注入氮气10分钟以蒸发残留的乙醇。 注意：需要执行此步骤以确保乙醇完全蒸发。在此步骤中，样品的体积约为20 mL。 将样品在-80°C冷冻至少24 h。 注意：需要执行此步骤以使冷冻干燥过程更有效。 将样品在-50°C冷冻干燥约8 h。将样品储存在-20°C直至准备使用。 注意：冷冻干燥机在室内-50°C时产生强大的真空，以干燥样品，但保留了大多数化合物，例如多酚。 纯化多酚提取物的制备 称量冷冻干燥的提取样品。 注意：此步骤中提取物的体积约为10 mL。 将约20 mL氯仿加到装有样品的100 mL烧杯中。使用搅拌盘。混合溶液5分钟。 将混合物倒入分液漏斗中。让粗提取物在室温下倾析1小时。 注意：在此步骤，将形成两相混合物。 此后，丢弃底层（氯仿相）并将水层收集到干净的烧杯中。 向烧杯中加入两体积的乙酸乙酯。使用磁力搅拌棒在室温搅拌混合物5分钟。 使用带真空抽吸功能的冷布氏漏斗通过2号滤纸过滤混合物。 将过滤后的样品转移至圆底烧瓶中。使用旋转蒸发仪至62°C和50 rpm，并蒸发乙酸乙酯约30分钟。 将样品在-50°C冷冻干燥8 h。将样品转移到50 mL锥形管中，并保存在-20°C下。 （负二十摄氏度）

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1. 从冷冻干浆果粉中制备粗提取物。 要开始此过程，请将试剂作为专家协议中的大纲准备。 接下来，称出10克冷冻干燥的黑莓粉。 将黑莓粉加入含有 100 mL 80% 水乙醇的 1 L 圆底烧瓶中。 将烧瓶放入 25 °C 的超声波浴中。 在柔和的光线下连续清除氮气。在 42 kHz、135 W 下对混合物进行声波化 20 分钟。 在此之后，使用具有真空吸力的冰镇布赫纳漏斗，通过过滤#2过滤。 注：在此步骤结束时，样品的残差将显示在滤纸上;这叫做过滤蛋糕。 用 50 mL 的 100% 乙醇冲洗滤饼。保存滤乳物，将滤饼添加到含有 100 mL 80% 水乙醇的 1 L 圆底烧瓶中。 通过声波、过滤和清洗混合物重复提取过程。 将两种滤物组合成含有 50 mL 80% 水乙醇的圆底烧瓶。 注：最终体积应约为300 mL。 在 62 °C 和 50 rpm 下使用旋转蒸发器蒸发溶剂。继续，直到乙醇不再蒸发。 注：此过程大约需要 45 分钟。 将样品转移到 50 mL 锥形管中。在管顶部注入氮气10分钟，蒸发任何剩余的乙醇。 注：需要此步骤来确保乙醇的完全蒸发。此步骤的样品体积约为 20 mL。 将样品在-80°C下冷冻至少24小时。 注：需要此步骤，以便进行更高效的冷冻干燥过程。 在-50°C下将样品冷冻干燥约8小时。样品储存在-20°C，直到准备好使用。 注：冷冻干燥机在-50°C下在室内产生强大的真空，以干燥样品，但保留大部分化合物，如多酚。 纯化多酚提取物的制备 称量冷冻干燥的萃取样品。 注：此步骤中提取物的体积约为 10 mL。 将约 ±20 mL 的氯仿添加到 100mL 烧杯中。使用搅拌板。混合溶液5分钟。 将混合物倒入分离漏斗中。让粗提取物在RT下1小时。 注：在此步骤中，将形成两相混合物。 在此之后，丢弃底层（氯仿相），将水层收集到干净的烧杯中。 将两卷乙酸乙酯添加到烧杯中。使用磁搅拌棒在RT下搅拌混合物5分钟。 使用带真空吸力的冷冻布赫纳漏斗，通过过滤#2过滤混合物 将过滤过的样品转移到圆底烧瓶中。使用旋转蒸发器至62°C和50 rpm，蒸发乙酸乙酸乙酯约30分钟。 将样品在-50°C下冷冻干燥8小时。将样品转移到 50 mL 圆锥管中，并将其储存在 -20 °C。 （负二十摄氏度）

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1冻干浆果粉粗提物的制备。 要开始此程序，请按照专家方案中的大纲准备试剂。 接下来，称出10克冻干黑莓粉。 将黑莓粉加入含有100毫升80%水乙醇的1L圆底烧瓶中。 将烧瓶置于25°C的超声波浴中。 在柔和的光线下持续的氮气吹扫。在42 kHz，135 W下对混合物进行超声波处理20分钟。 之后，使用带真空抽吸的冷冻布氏漏斗，通过#2滤纸过滤混合物。 注：在这一步结束时，样品的残余物出现在滤纸上，称为滤饼。 用50毫升100%乙醇冲洗滤饼。保存滤液，并将滤饼添加到含有100 mL 80%水乙醇的1L圆底烧瓶中。 通过超声、过滤和洗涤混合物，重复提取过程。 将两种滤液混合到一个装有50毫升80%乙醇的圆底烧瓶中。 注：最终体积约为300毫升。 在62°C和50 rpm下使用旋转蒸发器蒸发溶剂。继续这样做，直到乙醇不再蒸发。 注意：这个过程大约需要45分钟。 将样品转移至50 mL锥形管中。在管顶部注入氮气10分钟，以蒸发剩余的乙醇。 注：此步骤是为了确保乙醇完全蒸发。此步骤中的样品体积约为20毫升。 将样品在-80°C下冷冻至少24小时。 注意：这一步需要考虑到一个更有效的冷冻干燥过程。 在-50°C下冷冻干燥样品约8小时。在-20°C下储存样品，直到可以使用。 注：冷冻干燥机在-50°C的温度下在室内产生一个强大的真空，以干燥样品，但保留了大部分化合物，如多酚。 纯化多酚提取物的制备 称取冻干提取样品。 注：此步骤中提取液的体积约为10毫升。 向100mL烧杯中加入约20ml氯仿。用搅拌盘。混合溶液5分钟。 将混合物倒入分液漏斗中。让粗提物在室温下倾析1h。 注意：在这一步，将形成两相混合物。 之后，丢弃底层（氯仿相），并将水层收集到干净的烧杯中。 向烧杯中加入两体积的乙酸乙酯。使用磁力搅拌棒在室温下搅拌混合物5分钟。 使用带真空抽吸的冷冻布氏漏斗，通过#2滤纸过滤混合物 将过滤后的样品转移到圆底烧瓶中。使用旋转蒸发器至62°C和50 rpm，蒸发乙酸乙酯约30分钟。 在-50°C下冷冻干燥样品8小时。将样品转移到50 mL锥形管中，并在-20°C下储存。 （负20摄氏度）

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