IntroductionDifferentiated thyroid

IntroductionDifferentiated thyroid cancer (DTC), in general, has a good prognosis with a >90% chance of being cured [1]. However, DTC can shorten life span in cases of metastatic spread. Therefore, it is important to develop tumour markers that allow early detection of tumour dissemination. Serum thyroglobulin (sTg), the currently established tumour marker for thyroid carcinoma, is organ-specific and exclusively expressed by normal as well as thyroid carcinoma cells [2], [3]. In most cases, an increase in this tumour marker indicates tumour relapse, although the reliability of laboratory tests can be limited by the presence of anti-Tg antibodies or the dependence on thyroid stimulating hormone (TSH) stimulation [3], [4]. Additional tumour markers for DTC, such as Tg-mRNA or TSH-receptor (TSH-R) exhibiting cells exist, however they are currently only used for research purposes, and clinical routine tests based on these markers are not yet available [5]. Therefore, our study investigates whether circulating epithelial cells (CEC) can be used as a direct readout of tumour dissemination into the bloodstream.CECs originate from a primary tumour, and can be detected upon release into the circulatory system. These cells are characterised by the epithelial-specific surface antigen EpCAM (Epithelial Cell Adhesion Molecule, 17A-1), which is expressed at markedly higher levels in most carcinoma cells and CECs than in normal, non-cancerous tissues [6], [7], [8], [9], [10]. EpCAM is therefore a carcinoma-associated marker, but by no means organ-specific. Various studies on different cancer types showed a correlation between the number of CECs and disease progression after treatment [6], [8], [11], [12]. This correlation is applied most frequently in assessing breast cancer prognosis [13]. Few DTC studies exist, which investigate the correlation between the presence of CECs and their change in numbers following radioiodine ablation therapy [14], [15]. However, due to the lack of organ-specific markers, the tissue origins of the CECs detected in these studies remain uncertain. This makes it necessary to further characterise the cells identified using EpCAM to evaluate the significance of CEC quantification.One approach to detect the origin of CECs is to analyse their specific messenger ribonucleic acids (mRNAs). A number of studies investigated the clinical value of analysing mRNAs of proteins typically found in the thyroid gland of DTC patients. The mRNAs analysed include Tg, TSH-R, sodium–iodide symporter (NIS) and thyroperoxidase (TPO) [2], [3], [5], [16], [17]. Although these studies analysed the total mRNA present in blood samples, they did not include analysis at the single cell level. Precise single cell level characterisation would be extremely useful in identifying the cell clones responsible for metastasis, and therefore poor prognosis. Such molecular level insights could potentially improve therapeutic decision-making, since these would allow more accurate targeting of therapeutic approaches, i.e. personalised medicine.Therefore, this study aims to determine the origin of different CECs, as defined by EpCAM expression, by testing these cells for mRNAs typically found in the thyroid gland. The priority of this study is to establish the method, and assess its technical feasibility. This study does not attempt to assess its application within the clinic or evaluate possible clinical implementation.

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介绍 分化型甲状腺癌（DTC），一般地，与被固化的：[1]> 90％的机会预后良好。然而，DTC可以缩短转移扩散的情况下寿命。因此，大力发展肿瘤标志物，使早期发现肿瘤的传播是很重要的。血清甲状腺球蛋白（STG），当前建立的肿瘤标志物甲状腺癌，是器官特异性和由正常以及甲状腺癌细胞[2]，[3]只表示。在大多数情况下，增加了在该肿瘤标记指示肿瘤复发，虽然实验室试验的可靠性可以通过抗Tg的抗体的存在或对甲状腺的依赖限制刺激激素（TSH）刺激[3]，[4]。额外的肿瘤标志物为DTC，例如为Tg-mRNA或TSH受体（TSH-R）表现出的细胞的存在，然而，他们目前仅用于研究目的，并根据这些指标的临床常规试验尚未公布[5]。因此，我们的研究调查是否循环上皮细胞（CEC）能够被用作直接读出肿瘤传播到血流中。 的CEC从原发肿瘤起源，并且可以在释放到循环系统中被检测到。这些细胞的特征在于上皮特异性表面抗原的EpCAM（上皮细胞粘附分子，17A-1），其在显着更高的水平在大多数癌细胞和的CEC表达比在正常的非癌性组织[6]，[7 ]，[8]，[9]，[10]。因此EpCAM的是癌相关标记，而是由器官特异性的装置。在不同的癌症类型的各种研究表明处理后[6]，[8]，[11]，[12]的CEC的数量和疾病进展之间的相关性。这种相关性是在评估乳腺癌预后[13]最频繁施用。少数研究DTC存在，其调查的CEC的存在以及它们在数量以下放射性碘消融治疗[14]的变化，[15]之间的相关性。然而，由于缺乏器官特异性标志物，在这些研究中检测到的CEC的组织起源仍然是不确定的。这就需要进一步鉴定使用的EpCAM评估CEC定量的意义确定的细胞。 一种方法来检测的CEC的起源，分析其特定的信使核糖核酸（mRNA的）。大量的研究调查分析通常在DTC患者的甲状腺中发现的蛋白质的mRNA的临床价值。的mRNA的分析包括Tg时，TSH-R，钠 - 碘转运体（NIS）和甲状腺过氧化物酶（TPO）[2]，[3]，[5]，[16]，[17]。虽然这些研究分析总mRNA存在血液样本中，他们并没有包括在单细胞水平分析。精确单细胞水平表征将在识别负责转移的细胞克隆非常有用的，因此预后不良。这种分子水平的见解可能会提高治疗的决策，因为这将允许的治疗方法更准确的定位，即个性化医疗。 因此，本研究的目的是确定不同的CEC的起源，通过EpCAM表达所限定，通过测试这些细胞通常在甲状腺中发现的mRNA。这项研究的重点是建立方法，并评估其技术可行性。这项研究并没有试图去诊所内评估其应用或评估可能的临床实施。

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介绍 一般来说，分化的甲状腺癌（DTC）预后良好，治愈的几率为[90][1]。然而，在转移性传播的情况下，DTC可以缩短寿命。因此，开发肿瘤标记物，以便及早发现肿瘤传播是很重要的。血清胸腺蛋白（sTg），目前建立的甲状腺癌的肿瘤标志物，是器官特异性，完全由正常细胞和甲状腺癌细胞[2]，[3]表达。在大多数情况下，肿瘤标记的增加表明肿瘤复发，尽管实验室测试的可靠性可能受限于抗Tg抗体的存在或甲状腺刺激激素（TSH）刺激的依赖[3]，[4]。DTC的其他肿瘤标记，如Tg-mRNA或TSH受体（TSH-R）的显示细胞存在，但它们目前仅用于研究目的，并且基于这些标记的临床常规测试尚未提供[5]。因此，我们的研究研究循环上皮细胞（CEC）是否可以作为肿瘤传播到血液的直接读出。 CEC 源自原发性肿瘤，在释放到循环系统时可检测到。这些细胞的特点是上皮特异性表面抗原EpCAM（上皮细胞粘附分子，17A-1），在大多数癌细胞和CEC中，其表达水平明显高于正常、非癌组织[6]、[7]、[8]、[9]、[10]。].因此，EpCAM是一个与癌相关的标记，但绝不是器官特定的标记。对不同癌症类型的各种研究表明，治疗后CC的数量与疾病进展之间存在相关性[6]、[8]、[11]、[12]。这种相关性在评估乳腺癌预后时应用最频繁[13]。很少有DTC研究，研究在放射性碘消融疗法[14]，[15]之后，CEC的存在与它们数量的变化之间的关系。然而，由于缺乏器官特异性标记，在这些研究中检测到的CC的组织来源仍然不确定。因此，有必要进一步描述使用EpCAM识别的细胞，以评估CEC定量的意义。 检测C来源的一个方法是分析其特定的信使核糖核酸（mRNA）。多项研究调查了分析DTC患者甲状腺中通常发现的蛋白质的mRNA的临床价值。分析的mRNA包括Tg、TSH-R、碘化钠和甲状腺糖样糖酶（TPO）[2]、[3]、[5]、[16]、[17]。虽然这些研究分析了血液样本中存在的总mRNA，但它们不包括单细胞水平的分析。精确的单细胞水平特征对于识别负责转移的细胞克隆（因此预后不良）非常有用。这种分子层面的洞察可能改善治疗决策，因为这些见解将允许更准确地定位治疗方法，即个性化药物。 因此，本研究旨在通过测试这些细胞在甲状腺中常见的mRNA，确定由EpCAM表达定义的不同CE的来源。本研究的首要任务是建立该方法，并评估其技术可行性。这项研究并不试图评估其在诊所中的应用或评估可能的临床实施。

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介绍 分化型甲状腺癌（DTC）一般预后良好，治愈率>90%。然而，在转移性扩散的情况下，直接转矩控制可以缩短寿命。因此，重要的是开发肿瘤标记物，以便早期发现肿瘤扩散。血清甲状腺球蛋白（sTg）是目前公认的甲状腺癌肿瘤标志物，具有器官特异性，仅由正常和甲状腺癌细胞表达[2]，[3]。在大多数情况下，肿瘤标志物的增加表明肿瘤复发，尽管实验室试验的可靠性可能受到抗Tg抗体的存在或对促甲状腺激素（TSH）刺激的依赖性的限制[3]，[4]。DTC的其他肿瘤标志物，如存在细胞的TG mRNA或TSH受体（TSH受体），但是它们目前仅用于研究目的，并且基于这些标记的临床常规试验尚不可用[5 ]。因此，我们的研究探讨循环上皮细胞（CEC）是否可以作为肿瘤扩散到血流中的直接读数。 CECs起源于原发性肿瘤，释放到循环系统后即可检测到。这些细胞的特征是上皮特异性表面抗原EpCAM（上皮细胞粘附分子，17A-1），其在大多数癌细胞和CECs中的表达水平明显高于正常、非癌组织[6]、[7]、[8]、[9]、[10]。因此，EpCAM是一种与肿瘤相关的标记物，但绝非器官特异性。对不同癌症类型的各种研究表明，CECs的数量与治疗后的疾病进展有关[6]、[8]、[11]、[12]。这种相关性最常用于评估乳腺癌的预后[13]。很少有DTC研究存在，它们研究了CECs的存在及其在碘消融治疗后的数量变化之间的相关性〔14〕，〔15〕。然而，由于缺乏器官特异性标记物，在这些研究中检测到的CECs的组织来源仍然不确定。这使得有必要进一步描述用EpCAM鉴定的细胞，以评估CEC定量的意义。 检测CECs来源的一种方法是分析其特异性信使核糖核酸（mRNAs）。许多研究探讨了分析DTC患者甲状腺典型蛋白mRNAs的临床价值。分析的mRNA包括TG、TSH R、钠-碘转运体（NIS）和甲状腺过氧化物酶（TPO）〔2〕、〔3〕、〔5〕、〔16〕、〔17〕。尽管这些研究分析了血液样本中存在的总mRNA，但不包括单细胞水平的分析。准确的单细胞水平特征对于鉴别导致转移的细胞克隆，从而判断预后不良非常有用。这种分子水平的洞察可能有助于提高治疗决策，因为这将使治疗方法（即个性化药物）的靶向性更加准确。 因此，本研究旨在通过检测甲状腺中典型的mrna来确定EpCAM表达所定义的不同CECs的来源。本研究的重点是建立该方法，并评估其技术可行性。本研究不试图评估其在临床中的应用或评估可能的临床实施。

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