Step 5一Dilution refolding-The solub

Step 5一Dilution refolding-The solubilized glargine insulin analog protein is thendiluted into refolding buffer (20 mM Glycine, pH 10-11 at 6-100C.) to a final concentration of1.5 mg/ml and permitted to refold for 24 to 72 hours, preferentially about 48 hours, at 6-100C.Higher protein concentration may be used in the refold if desired, however, overall refoldefficiency will decrease. Sodium Chloride and Phosphate are then added to final concentrationsof 700 mM and 25 mM respectively, followed by pH adjustment to 7.0 to 9.0, preferably 7.9-8.0with 6M HCI.

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步骤5一稀释重折叠-当时溶解的甘精胰岛素类似物蛋白的 稀释到重折叠缓冲液（20mM甘氨酸，在6-100C pH为10-11。）至终浓度 为1.5mg / ml和允许的再折叠为24〜72小时，优选约48小时，在6-100C。 更高的蛋白质浓度可以在再折叠被用于如果需要的话，但是，整体再折叠 效率将降低。氯化钠和磷酸，然后加入到最终浓度 为700mM和分别为25毫米的，然后调节pH至7.0〜9.0，优选为7.9-8.0 ，用6M的HCl。

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步骤 5= 稀释再折叠 - 溶解甘精胰岛素模拟蛋白是 稀释成重新折叠缓冲液（20 mM 甘氨酸，pH 10-11 在 6-100C）到最终浓度 1.5毫克/毫升，允许在6-100C下重新折叠24至72小时，优先约48小时。 如果需要，在重新折叠中可以使用较高的蛋白质浓度，但是，整体再折叠 效率会降低。氯化钠和磷酸盐随后被添加到最终浓度中 分别为 700 mM 和 25 mM，然后 pH 调整为 7.0 到 9.0，优选为 7.9-8.0 与6M HCI。

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步骤5：稀释复性溶解的甘精胰岛素类似蛋白 稀释至复性缓冲液（20 mm甘氨酸，6-100℃时pH值为10-11）中，最终浓度为 1.5 mg/ml，允许在6-100℃下重新折叠24-72小时，优先约48小时。 如果需要，可以在复性中使用较高的蛋白质浓度，但是，总的复性 效率会降低然后将氯化钠和磷酸盐添加到最终浓度 分别为700 mm和25 mm，然后将pH值调整至7.0至9.0，最好为7.9-8.0 有6百万HCI。

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