Cell invasion assayTranswell invasi

Cell invasion assayTranswell invasion assay was performed to assess cell invasion. The upper surface of the filter (pore size, 8.0 μm;Biosciences, Heidelberg, Germany) was coated with basement membrane Matrigel (BD Bioscience) at a concentrationof 2 mg/ml and incubated at 4◦C for 3 h. Cells (2 × 104) were seeded into the upper chamber with 200 μl serum-freemedium. The lower chamber was supplemented with 750 μl medium containing 10% FBS. Following incubation for24 h at 37◦C, cells were fixed with 4% polyoxymethylene and stained with 0.5% crystal violet (Sigma–Aldrich). Then,stained cells were counted under a microscope. Five visual fields were selected and the average number was calculated.

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细胞侵袭测定进行 Transwell侵袭测定以评估细胞侵袭。滤膜的上表面（孔径为8.0μm； Biosciences，海德堡，德国） 以2 mg / ml 的浓度涂有基底膜基质胶（BD Bioscience），并在4℃下孵育3 h。将细胞（2×104）接种到装有200μl无血清 培养基的上室中。在下腔室中添加750μl含10％FBS的培养基。 在37 ℃下孵育24小时后，将细胞用4％聚甲醛固定，并用0.5％结晶紫（Sigma–Aldrich）染色。然后， 在显微镜下计数染色的细胞。选择五个视野并计算平均值。

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Cell invasion assay Transwell invasion assay was performed to assess cell invasion. The upper surface of the filter (pore size, 8.0 μm; Biosciences, Heidelberg, Germany) was coated with basement membrane Matrigel (BD Bioscience) at a concentration of 2 mg/ml and incubated at 4◦C for 3 h. Cells (2 × 104) were seeded into the upper chamber with 200 μl serum-free medium. The lower chamber was supplemented with 750 μl medium containing 10% FBS. Following incubation for 24 h at 37◦C, cells were fixed with 4% polyoxymethylene and stained with 0.5% crystal violet (Sigma–Aldrich). Then, stained cells were counted under a microscope. Five visual fields were selected and the average number was calculated.

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细胞侵袭试验 采用跨孔侵袭试验评估细胞侵袭性。过滤器的上表面（孔径，8.0μm； 生物科学，海德堡，德国）以一定浓度涂有基底膜基质凝胶（BD Bioscience） 将细胞（2×104）接种于200μl无血清的上腔中 中等。下室补充750μl培养基，含10%FBS。培养后 在37℃下24小时，用4%聚甲醛固定细胞，用0.5%结晶紫（Sigma-Aldrich）染色。然后， 染色细胞在显微镜下计数。选取5个视野，计算平均视野数。

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