1. Wash cells three times in cold P

1. Wash cells three times in cold PBS. 2. Resuspend cells in Cell Lysis Buffer 5 (diluted 1:5)* to a concentration of 1 x 107 cells/mL. 3. Freeze cells at ≤ -20 °C. Thaw cells with gentle mixing. Repeat the freeze/thaw cycle once. Trypan Blue and a microscope can be used to confirm cell lysis. Lysed cells will be blue. If cells are not lysed, repeat the freeze/thaw cycle as needed. 4. Centrifuge at 600 x g for 10 minutes at 2-8 °C to remove cellular debris. 5. Assay the supernate immediately or aliquot and store at ≤ -20 °C.

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1.洗涤细胞在冷PBS三次。2.将细胞重悬在细胞裂解缓冲液5（稀释1：5）* 1×107细胞/ mL的浓度。3.冷冻的细胞在≤-20℃。解冻细胞温和混合。重复冷冻/解冻循环一次。台盼蓝和显微镜可以用来确认细胞裂解。裂解细胞将变成蓝色。如果细胞不溶解，根据需要重复冷冻/解冻循环。4.离心600×g下在2-8℃下10分钟以除去细胞碎片。5.测定在≤-20℃时的上清液立即或等分试样并储存。

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1. 在冷PBS中清洗细胞三次。2. 将细胞悬浮在细胞赖沙液缓冲液5（稀释1：5）*中，浓度为1 x 107细胞/mL。3. 在 ±-20 °C 冷冻细胞。用温和混合解冻细胞。重复冻结/解冻循环一次。胰盘蓝和显微镜可用于确认细胞分光。莱沙细胞将是蓝色的。如果未对细胞进行分莱，根据需要重复冻结/解冻循环。4. 在600 x g下在2-8°C下离心10分钟，以清除细胞碎片。5. 立即或等分物测定超酸盐并储存在±-20°C处。

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一。在冷PBS中清洗细胞三次。2。在细胞裂解缓冲液5（稀释1:5）*中将细胞重新培养至1 x 107细胞/mL的浓度。在20℃℃下冷冻细胞，温和混合融化细胞。重复冷冻/解冻循环一次。台盼蓝和显微镜可用于确认细胞溶解。裂解细胞呈蓝色。如果细胞未溶解，根据需要重复冷冻/解冻循环。四。在600 x g下，在2-8°C下离心10分钟，以去除细胞碎片。5个。立即测定上清液或等份，并在≤-20°C下保存。<br>

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