Experimental design:Radioligand bin

实验设计：<br>在96孔OptiPlate中，一式两份进行放射性配体与膜相关IGF1受体的结合。将膜蛋白与50 pM [125I-Tyr31]-人IGF1在25°C下于150μl测定缓冲液（50 mM HEPES，150 mM NaCl，5 mM MgSO4、0.01％Triton X-100）的总体积中孵育150分钟，0.1％的HSA，完全不含EDTA的蛋白酶抑制剂），50 <br>µg的WGA包被的PVT微球和增加的人IGF1，人胰岛素或胰岛素287浓度（通常在0.1至10,000 nM之间）。通过在2,000 RPM下离心板2分钟来终止测定，并通过在Perkin Elmer TopCount NXT中计数来量化结合的放射性。<br>结果：<br>用人IGF1，人胰岛素和胰岛素287取代了125I-IGF1与膜相关重组人IGF1受体的结合。对IGF1的结合（IC50）抑制最大一半的浓度估计为0.27 nM（0.10-0.75 nM）。 HI为167 nM（范围139-211）。但是，即使在最高浓度的胰岛素287（10,000 nM）下，125I-IGF1也几乎不会被置换。因此，在存在0.1％人血清白蛋白的情况下进行的实验中，相对于人胰岛素，胰岛素287对人IGF1受体的亲和力似乎非常低。<br>此外，使用大鼠和狗来源的膜相关重组IGF1受体也获得了相似的结果。因此，胰岛素287对大鼠和狗IGF1受体的亲和力很低。<br>结论：<br>在存在0.1％人血清白蛋白的情况下进行的实验中，胰岛素287对人，大鼠和犬IGF1受体的亲和力似乎非常低，无法确定相对于HI的相对效价。

Experimental design:<br>Radioligand binding to membrane-associated IGF1 receptors was performed in duplicate in 96- well OptiPlates. Membrane protein was incubated for 150 minutes at 25°C with 50 pM [125I- Tyr31]-human IGF1 in a total volume of 150 μl assay buffer (50 mM HEPES, 150 mM NaCl, 5 mM MgSO4, 0.01% Triton X-100, 0.1% HSA, Complete EDTA-free protease inhibitors), 50<br>µg of WGA-coated PVT microspheres and increasing concentrations of human IGF1, human insulin or insulin 287 (typically between 0.1 and 10,000 nM). The assay was terminated by centrifugation of the plate at 2,000 RPM for 2 minutes and bound radioactivity quantified by counting in a Perkin Elmer TopCount NXT.<br>Results:<br>Binding of 125I-IGF1 to membrane-associated recombinant human IGF1 receptors was displaced with human IGF1, human insulin and insulin 287. Concentrations giving half-maximal inhibition of binding (IC50) were estimated to 0.27 nM (range 0.10-0.75 nM) for IGF1 and 167 nM (range 139-211) for HI. However, even at the highest concentration of insulin 287 (10,000 nM), 125I-IGF1 was hardly displaced. Thus, insulin 287 appears to have a very low affinity for human IGF1 receptors relative to human insulin in experiments performed in the presence of 0.1% human serum albumin.<br>Furthermore, similar results were obtained using membrane-associated recombinant IGF1 receptors of rat and dog origin. Thus, insulin 287 appears to have a very low affinity for rat and dog IGF1 receptors.<br>Conclusion:<br>Insulin 287 appears to have a very low affinity for human, rat and canine IGF1 receptors relative to human insulin in experiments performed in the presence of 0.1% human serum albumin and a relative potency compared to HI could not be determined.

实验设计：<br>放射配基与膜相关的IGF1受体的结合在96孔光板中重复进行。将膜蛋白与50 pM[125I-Tyr31]-人IGF1在总体积为150μl的分析缓冲液（50 mM HEPES、150 mM NaCl、5 mM MgSO4、0.01%Triton X-100、0.1%HSA、完全不含EDTA的蛋白酶抑制剂）中在25℃下孵育150分钟<br>微克WGA涂层的PVT微球，并增加人胰岛素样生长因子1、人胰岛素或胰岛素287的浓度（通常在0.1到10000纳米之间）。通过以2000转/分的速率离心平板2分钟终止测定，并通过在Perkin-Elmer TopCount NXT中计数定量结合放射性。<br>结果：<br>125I-IGF1与膜相关重组人IGF1受体的结合被人IGF1、人胰岛素和胰岛素287取代。IGF1的半数最大结合抑制浓度（IC50）估计为0.27nm（范围0.10-0.75nm），HI为167nm（范围139-211）。然而，即使在胰岛素287（10000纳米）的最高浓度下，125I-IGF1也几乎没有移位。因此，在0.1%人血清白蛋白存在下进行的实验中，胰岛素287似乎对人胰岛素样生长因子1受体的亲和力非常低。<br>此外，利用大鼠和狗来源的膜相关重组IGF1受体也获得了类似的结果。因此，胰岛素287似乎对大鼠和狗的IGF1受体有很低的亲和力。<br>结论：<br>在0.1%人血清白蛋白存在下进行的实验中，胰岛素287对人、大鼠和犬胰岛素样生长因子1受体的亲和力相对于人胰岛素似乎非常低，并且无法确定与HI相比的相对效力。<br>