Decidual tissue was washed, minced, and digested with 0.1 mg/mL collag的简体中文翻译

Decidual tissue was washed, minced,

Decidual tissue was washed, minced, and digested with 0.1 mg/mL collagenase IV and 0.01 mg/mL DNase I (Sigma) shaking in a water bath for 1 h at 37 °C. Released lymphocytes were filtered through 100-, 70-, and 40-μm sieves (BD Labware). Lymphocytes were dissolved in 20 mL 1.023g/mL Percoll (GE Healthcare) and layered on 10 mL 1.080g/mL and 12.5 mL 1.053g/mL Percoll for density gradient centrifugation (30 min at 800 × g). Lymphocytes were isolated from the 1.080 to 1.053 g/mL interface and dMϕ from the 1.053 to 1.023 g/mL interface. Cells were washed and directly stained for flow cytometric analysis or FACS sort (SI Appendix, Fig. S8). pNK, pT, and monocytes from leucopacks were isolated with RosetteSep (StemCell Technologies). For all leukocyte types, >95% purity was obtained.Cocultures, RNA isolation, microarray hybridization and analysis, flow cytometry, cytokine analysis, and imaging and statistics used are described in SI Appendix.
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蜕膜组织进行洗涤,切碎,并用0.1毫克消化/ ml胶原酶IV和0.01毫克/毫升DNA酶I(Sigma)中于37在水浴中摇动1个小时℃。释放淋巴细胞通过100-,70-和40-μm的筛(BD医学实验)进行过滤。淋巴细胞溶于20mL1.023克/毫升的Percoll(GE Healthcare)上,并(在800×g下30分钟)层叠在10毫升1.080克/ mL和12.5毫升1.053克/毫升的Percoll密度梯度离心分离。淋巴细胞从1.080到1.053克/毫升的界面和dMφ从1.053到1.023克/ mL的界面分离。洗涤细胞,并直接用于染色,流式细胞仪分析或FACS分类(SI附录,图S8)。的pNK,Pt和从leucopacks单核细胞ROSETTESEP(干细胞技术)中分离得到。对于所有类型的白细胞,>获得95%的纯度。<br><br>共培养物中,使用RNA分离,微阵列杂交和分析,流式细胞术,细胞因子分析,并成像和统计在SI附录中描述。
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在水浴中洗涤、切碎和消化0.1mg/mL胶原酶IV和0.01mg/mL DNase I(西格玛),在37°C下在水浴中摇动1小时。释放的淋巴细胞通过100、70和40μm筛子(BD实验室软件)进行过滤。淋巴细胞溶解在20 mL 1.023g/mL Percoll (GE 医疗保健) 和分层在 10 mL 1.080g/mL 和 12.5 mL 1.053g/mL Percoll 的梯度离心 (30 分钟在 800 × g).淋巴细胞从1.080至1.053 g/mL接口分离,dM+从1.053至1.023 g/mL接口分离。细胞被清洗并直接染色,用于流式细胞测量分析或FACS排序(SI附录,图。S8)。pNK、pT和单核细胞与RosetteSep(StemCell技术)一起分离。对于所有白细胞类型,纯度为±95%。<br><br>SI 附录中介绍了共培养、RNA 分离、微阵列杂交和分析、流式细胞测定、细胞因子分析以及使用的成像和统计。
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用0.1 mg/mL胶原酶IV和0.01 mg/mL脱氧核糖核酸酶I(Sigma)在37℃的水浴中振荡1小时,清洗、切碎和消化蜕膜组织。释放的淋巴细胞通过100、70和40μm筛(BD-Labware)过滤。将淋巴细胞溶解于20 mL 1.023g/mL Percoll(GE Healthcare)中,分层于10 mL 1.080g/mL和12.5 mL 1.053g/mL Percoll上进行密度梯度离心(800×g时30分钟)。从1.080到1.053 g/mL界面分离淋巴细胞,从1.053到1.023 g/mL界面分离dMü。细胞被清洗并直接染色用于流式细胞仪分析或FACS分类(SI附录,图S8)。用玫瑰花结(StemCell技术)分离了白斑中的pNK、pT和单核细胞。对于所有白细胞类型,纯度均大于95%。<br>共培养、RNA分离、微阵列杂交和分析、流式细胞术、细胞因子分析以及所使用的图像和统计数据在SI附录中描述。<br>
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